疗效。

　　1、CRC中的MAF高度激活

　　?在LM中观察到aSMA、p-MLC2和COL-I的显着更高表达，表明MAF的肌成纤维细胞和ECM重塑特征。

　　?接下来，从CRC患者的pTU(CAF)和LM(MAF)中分离出原代成纤维细胞。MAF显示出aSMA和p-MLC2的显着上调，证实了肌成纤维细胞和细胞收缩性信号的增加。FAs的量化显示MAFs中FAs的平均面积更大（图L和M），支持CRCMAFs被高度激活。

　　2、晚期CRC患者的ECM重构和硬化特征

　　?为了鉴定与肝转移相关的基因表达特征，我们对CRC患者的pTU和LM进行了RNA测序（RNA-seq）。使用通路相互作用数据库(PID)对LM中上调基因进行的基因集分析(GSA)揭示了整合素信号传导的显着富集。为了进一步表征成纤维细胞的基因表达，我们在成功富集后对分离的原代CAF和MAF进行了RNA-seq。

　　?我们鉴定了3，721个差异表达的基因。GO确定了MAF中上调的肌成纤维细胞/ECM重塑特征。KEGG确定了ECM-受体相互作用和FA特征和PID确定了整合素信号（图H）。此外，基因集富集分析(GSEA)还揭示了差异表达基因的肌动蛋白介导的细胞收缩、FA、ECM成分、肌生成和血管生成特征的强烈富集（图I-M）。

　　3、MAFs增加微环境硬度，支持血管生成

　　?我们进行了凝胶重塑分析，并观察到MAF显示出更密集、更复杂的F-肌动蛋白网络（图A），并且可以比CAF更大程度地收缩凝胶（图B）。在新鲜和冷冻保存的组织中，我们观察到LM的基质硬度显着增加（图C-D）。基质硬度与来自同一患者的样本中的COL-I、aSMA和p-MLC2表达相关（图E-G）。

　　?基质硬化调节EC增殖、血管生成、血管生长和分支，为了研究这种联系，我们评估了LM中的脉管系统，并观察了基质硬度和CD31血管面积之间的相关性（图H）。当在凝胶内培养时，允许成纤维细胞重塑基质，MAFs诱导EC发芽的程度显着高于CAFs（图I-K）。因此，MAF支持伴随局部ECM重塑的细胞因子产生血管生成。

　　4、肾素-血管紧张素系统抑制目标成纤维细胞

　　?对新鲜分离的MAF与肝源性成纤维细胞的qPCR分析显示RAS系统的所有关键成分（血管紧张素原[AGT]、肾素[REN]、血管紧张素转化酶[ACE]和AT-1[AGTR1]的表达显着增加）。此外，MAFs表达的AGT和AGTR1水平显

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